PCR Mix foi otimizada para utilização em rotinas de laboratório para amplificação de fragmentos de DNA de 0,2 a 2,0 kb por PCR.
É uma solução pronta para o uso que contém enzima Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl2 e tampões de reação em concentrações ideais para a amplificação de DNA e cDNA através da técnica de PCR.
Especificações Técnicas
Apresentação:
- 100 reações
Armazenamento:
- - 20ºC - Misture bem antes de usar
Componentes:
- Cada sistema contém quantidade de reagentes suficiente para realizar 100 reações de amplificação por PCR em volume final de 50µL. - 2 microtubos contendo: 1.250 µL PCR Mix LGC, 2X - 2 microtubos contendo: 1.000 µL Água ultra-pura DEPC tratada, livre de endonucleases. - PCR Mix LGC, 2X: Taq DNA Polimerase (2,5 U reação) em concentração e tampão de reação adequados, (Tris-HCl pH: 8,5, KCl), 200 mM cada dNTP, 1,5 mM MgCl2
Procendência da enzima:
- A Taq DNA Polimerase recombinante é obtida da bactéria Thermus aquaticus e expressa em E. coli.
Controle de Qualidade:
- Ensaios funcionais: A PCR Mix LGC é testada quanto a sua performance através da reação de amplificação em cadeia da polimerase (PCR), do fragmento de 452 pb correspondentes ao gene da gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase humano (GAP). - O produto de PCR é visualizado em géis de agarose 1,5% sob luz ultravioleta.
Protocolo Básico:
- Para cada reação no volume final de 50 µL, separar 25 µL da PCR MIX LGC 2X e adicionar o DNA molde, os primers e água purificada em volume total de 25 µL (os volumes podem ser aumentados proporcionalmente a este calculo básico).
Atividade enzimática associada:
- A enzima Taq DNA polimerase contida na PCR MIX LGC 2X apresenta atividade de polimerização 5’ – 3’, dependente da atividade de substituição da exonuclease, porém carece de atividade de exonuclease 3’ - 5’.
OBS: ESTE PRODUTO É UTILIZADO ESTRITAMENTE EM PESQUISA CIENTÍFICA, NÃO RECOMENDADO PARA O USO EM DIAGNÓSTICO CLÍNICO OU TERAPÊUTICO