Câmara de Neubauer Espelhada

Características da Câmara de Neubauer Espelhada

Utilizada na microbiologia, cultura de células e muitas aplicações que requerem o uso de suspensões de células, é necessário determinar a concentração celular. Frequentemente, pode-se determinar a densidade celular de uma suspensão espectrofotometricamente; no entanto, essa forma de determinação não permite uma avaliação da viabilidade celular, nem é possível distinguir os tipos de células.

Um dispositivo utilizado para determinar o número de células por unidade de volume de uma suspensão é chamado de câmara de Neubauer. O tipo de câmara mais utilizado é o hemocitômetro, pois foi originalmente projetada para realizar contagens de células sanguíneas.

Especificações Técnicas Da Câmara de Neubauer Espelhada

- Malhas de leitura espelhadas, com 80 compartimentos;
- Desenho da malha: Neubauer;
- Profundidade: 0,100 mm;
- Resolução: 0,0025 mm2;
- Volume: 0,1 µL;
- Altura: 4 mm;
- Comprimento: 7,5 cm;
- Largura: 3 cm;
- Largura área espelhada: 3 cm.

Apresentação:

- 01 Câmara tipo Neubauer Melhorada Espelhada;
- 02 Lamínulas.

Como preparar a câmara de Neubauer Espelhada?

Para preparar a câmara de Neubauer espalhada, a superfície polida semelhante a um espelho é cuidadosamente limpa com papel para lentes.

A lamela também é limpa. As lamínulas para as câmaras de Neubauer são feitas especialmente e são mais grossas que as das lamínulas para microscopia convencional, pois devem ser pesadas o suficiente para superar a tensão superficial de uma gota de líquido.

A lamela é colocada sobre a superfície de contagem antes de colocar a suspensão de células. A suspensão é introduzida em um dos poços em forma de V com uma pipeta pasteur ou outro tipo de pipeta. A área sob a lamínula é preenchida por ação capilar. Deve ser introduzido líquido suficiente para que a superfície espelhada seja apenas coberta.

A câmara de Neubauer espelhada carregada é então colocada na platina do microscópio e a grade de contagem é focalizada em baixa potência.

Quais cuidados devo tomar ao utilizar a câmara de Neubauer espelhada?

É essencial ser extremamente cuidadoso com as objetivas de maior potência, uma vez que a câmara de Neubauer é muito mais espessa do que uma lâmina convencional.

A câmara ou uma lente objetiva pode ser danificada se o usuário não tomar cuidado. Uma grade inteira em hemacitômetros padrão com réguas de Neubauer pode ser vista em 40x (objetiva 4x).

Como efetuar a contagem na câmara de Neubauer Espelhada?

As divisões principais separam a grade em 9 quadrados grandes (como uma grade do jogo da velha). Cada quadrado tem uma área de superfície de um mm quadrado e a profundidade da câmara é de 0,1 mm. Assim, toda a grade de contagem encontra-se sob um volume de 0,9 mm ao cubo.

As suspensões devem ser diluídas o suficiente para que as células ou outras partículas não se sobreponham na grade e devem ser distribuídas uniformemente.

Para realizar a contagem, determine a ampliação necessária para reconhecer o tipo de célula desejado. Agora conte sistematicamente as células em quadrados selecionados de modo que a contagem total seja de 100 células ou mais (número de células necessárias para uma contagem estatisticamente significativa).

Para células grandes, isso pode significar contar os quatro grandes quadrados dos cantos e o do meio. Para uma suspensão densa de células pequenas, você pode contar as células nos quatro cantos de 1/25 mm² mais o quadrado do meio no quadrado central. Sempre decida sobre um padrão de contagem específico para evitar viés. Para células que se sobrepõem a uma pauta, conte uma célula como "dentro" se ela se sobrepuser à pauta superior ou direita, e "fora" se ela se sobrepor à pauta inferior ou esquerda.

Esta é uma maneira de determinar a contagem de partículas usando uma câmara de Neubauer Espelhada. Suponha que você faça uma contagem conforme descrito acima e conte 187 partículas nos cinco pequenos quadrados descritos. Cada quadrado tem uma área de 1/25 mm ao quadrado (ou seja, 0,04 mm ao quadrado) e profundidade de 0,1 mm. O volume total em cada quadrado é (0,04) x (0,1) = 0,004 mm ao cubo. Você tem cinco quadrados com volume combinado de 5x (0,004) = 0,02 mm ao cubo. Assim, você contou 187 partículas em um volume de 0,02 mm cúbico, resultando em 187 / (0,02) = 9350 partículas por mm cúbico. Existem 1.000 milímetros cúbicos em um centímetro cúbico (o mesmo que um mililitro), então sua contagem de partículas é de 9.350.000 por ml.

As células geralmente são grandes o suficiente para exigir a contagem em uma área de superfície maior. Por exemplo, você pode contar o número total de células nos quatro grandes quadrados de canto mais o meio combinado. Cada quadrado tem área de superfície de 1 mm-quadrado e profundidade de 0,1 mm, dando-lhe um volume de 0,1 mm-cúbico. Suponha que você contou 125 células (total) nos cinco quadrados. Você tem então 125 células por 0,5 mm ao cubo, o que equivale a 250 células / mm ao cubo. Novamente, multiplique por 1000 para determinar a contagem de células por ml (250.000).

Às vezes, você precisará diluir uma suspensão de células para obter a densidade celular baixa o suficiente para a contagem. Nesse caso, você precisará multiplicar sua contagem final pelo fator de diluição. Por exemplo, suponha que, para contar, você tenha que diluir uma suspensão de Chlamydomonas 10 vezes. Suponha que você tenha obtido uma contagem final de 250.000 células / ml conforme descrito acima. Então, a contagem na suspensão original (não diluída) é 10 x 250.000, que é 2.500.000 células / ml.